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产品名称:

胎牛血清

产品型号: GIBCO 产品时间: 2019-12-03
GIBCO胎牛血清细胞冻存步骤以及真假辨别详细说明。
根据您的特定细胞培养需求(从基础研究到专业检测)选择适合的血清。无论您是需要具有最低病毒风险、最低内毒素水平的血清,还是需要适用于特殊应用和分析的血清,Gibco 产品都能提供卓越的价值。秉承我们对品质的坚定承诺

产品概述

   GIBCO胎牛血清细胞冻存步骤

  1、在冷冻管上标记好日期、研究者姓名、细胞数、细胞传代数和细胞类型(以及任何其他有用信息,比如遗传修饰)。

比特棋牌  2、如果细胞贴壁,则去除细胞培养基,用 PBS 洗涤,加入足量胰蛋白酶覆盖细胞并在 37°C 培养箱中孵育约 2 分钟。在细胞培养基中重悬细胞并移入 50 mL Falcon 管中。

比特棋牌  3、如果细胞为悬浮状态,只需将所需体积细胞直接移入 50 mL Falcon 管中。

  4、用血细胞计数器进行细胞计数以确定其活力。用于冷冻保存的细胞活力至少应为 75%。

比特棋牌  5、在室温下以 1,000 rpm 离心 5 分钟。

  6、去除上清液,轻轻散开沉淀物。

  7、添加冷冻培养基至所需的细胞密度。对于哺乳动物细胞,所需细胞密度通常为10^6/mL 冷冻培养基。在室温下,细胞不应在冷冻培养基中超过 10 分钟。

  8、在各冷冻管中各分装 1 mL,并盖紧盖子。

  9、室温下将冷冻管移至 CoolCell 快速冷冻机中,然后放入 -80°C 冰箱中。CoolCell 快速冷冻机将确保温度以 1°C/分钟稳步下降。

  10、大约 24 小时后,从 CoolCell 快速冷冻机中取出冷冻管并转移到液氮中长期储存。

  更换GIBCO胎牛血清有技巧:

  a。不同来源或不同批次GIBCO血清的更换:在一个批次的血清快使用完毕,需更换使用不同来源或不同批次的血清时,宜让细胞有一个逐步适应新血清的过程,这样就几乎不会因为更换血清而影响细胞的生长状态。具体的方法是,在初始使用旧批次血清的情况下,逐渐增加不同来源或不同批次血清的比例,例如把不同来源或不同批次血清的比例逐步调整为0%、30%、60-70%、100%。这样经过约3代细胞的逐渐适应,细胞通常会在新来源或新批次的血清中生长良好。

  b。从GIBCO血清更换成新生牛血清:有的些细胞,如HEK293、HEK293T、HeLa、CHO-K1、NIH3T3等常见细胞株通常是可以用新生牛血清培养的。如果之前是使用胎牛血清,想更换为新生牛血清培养,也需要让细胞有一个逐步适生牛血清的过程。例如把新生牛血清的比例逐步调整为0%、30%、60-70%、100%。对于不太确定是否适合新生牛血清培养的细胞。

血清真假辨别:

  一、外观

比特棋牌  拿到血清,先接触的是血清外观,对于缺少细胞培养经验的人来说,外观的判断尤为重要

  1、GIBCO血清颜色

  根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色,我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl,实际上,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响,这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

  假的血清的采血点很分散,大多是由屠户采血后马上离心收集,所以很少会有溶血,表现出明亮的蜡黄色,当然,假的血清也很少有标准意义上的胎牛血清。

  进口血清或多或少总有点溶血,因为真正的血清凝血功能差,红细胞容易破裂。

  总的来说,假的的血清呈现出蜡黄。进口的血清,质量好的呈现出谈黄、微红色,差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然,热灭活血清或保存不当的血清,由于血红蛋白的破坏氧化,会呈现出暗红,甚至咖啡色。

  2、GIBCO血清沉淀

  很多血清客户,会发现进口血清有沉淀,从而怀疑血清的质量问题,这是没有根据的。

  血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生,对血清质量没有任何影响,沉淀的产生原因很多,和厂家的加工生产方式密切相关。

  假的的血清,大多来自北方,由于价格低廉,保存环境都不好,从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融,每次冻融过程,就会析出部分纤维蛋白沉淀,这样,血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”,很少有沉淀产生。

  GIBCO血清过滤分装前很少会反复冻融,生产后的成品也是清澈的,但随着时间的推移,血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然,进口的新生牛血清,一般牛龄都在2周左右,血清中的各种蛋白含量明显偏高,生产后血清可能会浑浊,甚至有大量沉淀。

  当然,购买回来的血清都是冰冻状态,使用时需要融化,融化过程好在温度较低的状态下慢慢进行,否则沉淀相对较多,虽然沉淀并不直接影响血清的质量,但对细胞的显微观察有一定的阻碍。

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